第三节 常见标本的采集、固定与保存

人体寄生虫学实验所观察的标本可分为玻片标本、液浸标本、活体标本、干燥标本和大体病理标本等。理想的标本应具有造型美观、内容清晰、易于观察的特点，常见寄生虫标本的采集、固定与保存要点如下。

一、医学蠕虫

（一）成虫标本

将患者粪便收集于容器内，然后加水搅匀后，用直径3mm的粗筛过滤，采集残留于筛上的寄生虫。小型寄生虫多半通过筛孔而沉降于皿底，用沉淀法清洗数次后，在沉淀物中寻找寄生虫。如解剖动物，则将获取的全部脏器放于白瓷盘或玻璃皿中，剪开肠管，收集附着于小肠壁的寄生虫。如果是粗大的虫体，则极易发现；如果是细小的虫体，则可在解剖镜下检查。洗净虫体表面污物后，放入5%甲醛或75%乙醇固定液中，贴上标签，密封保存。

1.吸虫 为了使活的吸虫虫体肌肉松弛，先将虫体放于盛有0.85%生理盐水的试管或瓶内振荡清洗，然后倾出液体，加入等量0.85%～0.9%生理盐水和固定液的混合液。如需制作染色整体标本，应根据虫体的大小、厚薄，分别用玻片将虫体压平、压薄，然后用固定液进行固定。凡用含有升汞固定的标本会产生许多汞盐沉淀，沉积于组织内影响今后制片观察，故需用0.5%碘乙醇（颜色似葡萄酒）浸泡12小时，以除去汞盐沉淀，再放入70%乙醇中退去碘的颜色，最后将虫体保存于70%乙醇中。

2.绦虫 绦虫往往头节深埋肠黏膜中，因此从解剖动物肠管发现绦虫时，为使采集的绦虫保持完整，在收集绦虫时应注意如下几点：①依肠壁的纵径剪开见有绦虫时，将含有头节的肠壁连同其所附的整个虫体浸入自来水中数小时，每隔0.5小时换水1次，共换水3～4次；②自来水能使绦虫肌肉松弛，故浸入相当时间后，绦虫头节即自行与肠壁脱离，或较易从肠管中拖出；③头节脱出肠壁后，将整条绦虫仍置于自来水之中1～2小时，使其清洁，肌肉松弛，避免虫体扭团成结，影响今后对成节、孕节的制片观察；④绦虫标本较长，最好用10%甲醛生理盐水液固定保存。如要鉴定虫种，则需要制作染色玻片标本，须将虫体按厚、薄分段置于两玻片中加压或将虫体夹于两张玻片中，玻片两端用橡皮筋绑紧，使虫体压平，压薄后放入5%甲醛生理盐水固定液中24～48小时。

3.线虫 线虫成虫水洗时间不宜过长，除去头端内及交合伞上的附着物后，即将虫体放入加热至60℃～70℃的热水或乙醇等固定液中固定，这样可获得伸直的虫体，待冷却后移于70%～80%乙醇或巴氏液（3%甲醛生理盐水）中保存。

（二）幼虫标本

1.绦虫幼虫（囊尾蚴） 将采得的囊尾蚴标本用生理盐水清洗干净，用拇指和食指将幼虫的头节轻轻挤向外翻，夹于两玻片中，玻片两端用橡皮筋扎紧将其压平压薄，浸于10%甲醛液内固定24～48小时，最后由玻片上取下虫体保存在10%甲醛生理盐水中。

2.线虫幼虫（钩蚴） 先用玻管滤纸培养法或双重玻皿滤纸培养法收集感染期钩蚴，然后吸取大批钩蚴到沉淀管内，离心沉淀除去水分，加入10%甲醛液固定保存。

（三）虫卵标本

1.小型虫卵 取粪便5～10g，放入小烧杯内，加少量清水，搅匀，通过80～100目尼龙网筛过滤至含500ml清水量杯中，静置30～40分钟后，倾去上部浑浊液，再加水至500ml静置30分钟留沉淀物，再反复沉淀数次，直至上部的水澄清为止。弃去上清液，加3%甲醛液与含虫卵沉淀粪渣混合进行固定24小时，然后再更换为5%甲醛生理盐水并加丙三醇数滴密封保存。

2.大型虫卵 水洗沉淀方法基本同上，区别为换以40～60目尼龙网筛过滤粪液，每次换水后静置15～25分钟。固定保存方法同上。受精蛔虫卵和钩虫卵容易发育成胚胎，故固定时需用加热至70℃的10%甲醛进行处理，以阻止卵细胞继续发育。

二、医学原虫

（一）肠道内原虫标本

从患者粪便获得溶组织内阿米巴、结肠内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、人毛滴虫、结肠小袋纤毛虫等，立即制成涂片标本，用肖定固定液固定，再移置于70%乙醇内保存，以备日后染色制片观察。

（二）腔道内原虫标本

1.阴道毛滴虫 取阴道分泌物在玻片上涂成薄膜，在空气中晾干，用甲醇固定后，即可短期保存，如用吉氏染液染色30～60分钟，水洗晾干后即可长期保存。

2.齿龈内阿米巴与口腔毛滴虫 用牙签或小尖镊子挑取牙龈周围污垢物质，加一小滴生理盐水和血清于玻片中央调和均匀，使成一圆形薄膜，平置待尚未干燥而湿润时用肖定固定液固定，再移置于70%乙醇内保存，供日后染色制片、长期保存。

（三）组织内原虫标本

1.杜氏利什曼原虫 取骨髓穿刺液制成薄膜涂片，有时因取出的穿刺液较少，可用穿刺针在玻片上尽量涂抹均匀，在空气中晾干，用甲醇固定。如穿刺液很少，不易检出时，除经过培养增殖后进行诊断外，还可将待检患者的穿刺液接种于小白鼠腹腔，1～2个月后，取其肝、脾做涂片或印片检查；也可将肝、脾用研钵磨碎，加入适量生理盐水和血液稀释后，再涂制血片薄膜，待自然干燥后用甲醇固定。将以上用甲醇固定的涂片经吉氏染液染色后干燥保存待检。

2.弓形虫 取急性患者的体液、脑脊液经离心沉淀，取沉渣做涂片，干燥后用甲醇固定。当虫体较少时，可将待检体液或组织磨碎，加适量无菌生理盐水稀释或制成混悬液，注射于小白鼠腹腔内，经过1～3周，取腹腔渗出液或小白鼠肝、脾、脑磨碎制成厚膜涂片，待自然干燥后用甲醇固定。涂片经吉氏染液染色干燥后保存。

三、医学节肢动物

传播疟疾与利什曼病的蚊与白蛉等成虫通常可用针插好晾干，存放于昆虫盒内保存，盒内应放樟脑块以防虫蛀。蚊、白蛉、蝇等昆虫的卵、幼虫和蛹，以及蚤、虱、臭虫、蜱、螨等的发育各期均应保存于70%乙醇中。需要分离病原的昆虫常不做任何处理，收集于干净的试管或小瓶中保存。